炎癥小體的激活有多個(gè)重要的特征，如ASC斑點(diǎn)的形成、促炎性細(xì)胞死亡、具有生物活性的IL-1β/18細(xì)胞因子的分泌以及HMGB1的表達(dá)。為了檢測(cè)這些關(guān)鍵的特征，InvivoGen開發(fā)了體外研究炎癥小體激活中最-常-用的人源THP-1單核細(xì)胞系模型和廣泛用于報(bào)告系統(tǒng)的人源HEK293胚胎腎細(xì)胞系所衍生的細(xì)胞工具。

檢測(cè)炎癥小體激活的方法

1.使用RT-qPCR檢測(cè)NF-κB誘導(dǎo)的pro-IL-1β和NLRP3上調(diào)

2.使用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞術(shù)監(jiān)測(cè)細(xì)胞系中ASC斑點(diǎn)的形成

3.使用 Western blot 檢測(cè) caspase-1 的裂解或 pro-IL-1β/IL-18 的成熟

4.使用ELISA測(cè)定IL-1β、IL-18或HMGB1的釋放

5.使用乳酸脫氫酶（LDH）測(cè)定或碘化丙啶（PI）染色法檢測(cè)細(xì)胞焦亡

6.使用檢測(cè)IL-1β、IL-18分泌的報(bào)告細(xì)胞系

以上方法各有利弊，可以適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合這些方法來檢測(cè)炎癥小體的激活。

實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)ASC斑點(diǎn)

THP1-ASC-GFP Cells

THP1-ASC-GFP細(xì)胞可通過熒光顯微鏡觀察活細(xì)胞中ASC斑點(diǎn)的形成。它們以依賴NF-κB的方式穩(wěn)定表達(dá)ASC::GFP融合蛋白。在誘導(dǎo)劑如Poly(dA:dT)的刺激下，炎癥小體的激活可以通過觀察熒光ASC斑點(diǎn)的組裝來分析，不會(huì)干預(yù)炎癥小體的應(yīng)答。

監(jiān)測(cè)細(xì)胞焦亡

THP1-HMGB1-Lucia™ Cells

THP1-HMGB1-Lucia™細(xì)胞是一種可靠、方便的定量檢測(cè)細(xì)胞焦亡的工具，能取代測(cè)定LDH活性的經(jīng)典方法。此測(cè)定依賴于細(xì)胞溶解介導(dǎo)的HMGB1警報(bào)素，通過與Lucia熒光素酶的融合來測(cè)量其釋放。THP1-HMGB1-Lucia™細(xì)胞經(jīng)LPS啟動(dòng)和炎癥誘導(dǎo)劑如Poly(dA:dT)處理后引發(fā)細(xì)胞焦亡，從而釋放HMGB1::Lucia到細(xì)胞外環(huán)境中。通過測(cè)量QUANTI-Luc™檢測(cè)試劑產(chǎn)生的光信號(hào)，可以簡(jiǎn)單監(jiān)測(cè)上清液中HMGB1::Lucia的水平。

實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)IL-1β和IL-18的分泌

InvivoGen已開發(fā)出報(bào)告細(xì)胞系，能簡(jiǎn)單、快速、可靠地檢測(cè)和定量具有生物活性的人源（h）或鼠源（m）IL-1β和IL-18。這些細(xì)胞來源于人源胚胎腎HEK293細(xì)胞系。在激活細(xì)胞因子信號(hào)通路后，它們表達(dá)由NF-κB/AP-1誘導(dǎo)的分泌型堿性磷酸酶（SEAP）報(bào)告基因。使用QUANTI-Blue™溶液檢測(cè)試劑可以很容易地監(jiān)測(cè)上清液中的SEAP水平。

HEK-Blue™ IL-1β Cells& HEK-Blue™ IL-1R Cells

這些細(xì)胞可以監(jiān)測(cè)樣本中的hIL-1α/β、mIL-1α/β。兩種細(xì)胞系均表達(dá)內(nèi)源性人源IL-1受體（hIL-1R）。HEK-Blue™ IL-1β細(xì)胞對(duì)人源IL-1異構(gòu)體的敏感性高于鼠源的異構(gòu)體。我們建議使用此細(xì)胞系來進(jìn)行人源炎癥小體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(例如THP1衍生分析，見第6-7頁)，測(cè)試上清液樣本。HEK-Blue™ IL-1R細(xì)胞被穩(wěn)定轉(zhuǎn)染表達(dá)mIL-1R，賦予對(duì)mIL-1β更高的敏感性。因此，該細(xì)胞系更適合于從小鼠的血清或細(xì)胞突變物中檢測(cè)IL-1β。然而，它們的高靈敏度可以導(dǎo)致一些細(xì)胞（例如RAW264.7衍生細(xì)胞）出現(xiàn)高背景。

值得注意的是，這兩種細(xì)胞系都可以用來評(píng)估樣本中IL-1α警報(bào)素的水平。HEK-Blue™ IL-1β 和 HEK-Blue™ IL-1R細(xì)胞檢測(cè)一種亞型的特異性可通過在分析中加入針對(duì)另一種亞型的中和抗體來評(píng)估。

HEK-Blue™ IL-18 Cells

這些細(xì)胞提供了一個(gè)強(qiáng)大的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，監(jiān)測(cè)樣本中hIL-18和mIL-18的濃度。HEK-Blue™ IL-18細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)染穩(wěn)定表達(dá)hIL-18受體。這些細(xì)胞對(duì)hIL-18比mIL-18敏感。

使用Invivogen的細(xì)胞因子傳感器細(xì)胞

1.檢測(cè)具生物活性的細(xì)胞因子

2.具成本效益

3.短時(shí)間的實(shí)驗(yàn)操作

4.肉眼可視化實(shí)驗(yàn)結(jié)果

5.高靈敏度、高動(dòng)態(tài)范圍

6.適用于藥物篩選（正?；蚋咄亢Y選、藥物效應(yīng)動(dòng)力學(xué)等）

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文獻(xiàn)參考：

Martine P. et al. 2019. Cell Death Dis. doi: 10.1038/s41419-019-1491-7. HSP70 is a negative regulator of NLRP3 inflammasome activation.

Metho S. et al. 2019. Mol. Cell. doi: 10.1016/j.molcel.2018.11.08. The Crohn’s disease risk factor IRGM limits NLRP3 inflammasome activation by impeding its assembly and by mediating its selective autophagy.

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