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Chondrex&欣博盛生物：帶你了解蛋白純化

更新時(shí)間：2024-12-19   點(diǎn)擊次數(shù)：122次

Chondrex公司提供一系列用于蛋白質(zhì)純化的填料樹脂。Chondrex總結(jié)了下面不同蛋白純化方法，以幫助您選擇合適的填料樹脂來純化目的蛋白。如需購買Chondrex公司產(chǎn)品，咨詢產(chǎn)品技術(shù)問題，請(qǐng)聯(lián)系Chondrex授權(quán)代理商欣博盛生物。

 

1.離子交換色譜法(1，2)

●. 每個(gè)蛋白質(zhì)都帶有凈電荷，故蛋白質(zhì)具有等電點(diǎn)(pI)，等電點(diǎn)由蛋白質(zhì)的一級(jí)氨基酸序列決定。這種帶電性質(zhì)允許蛋白質(zhì)在離子交換色譜中選擇性地與帶相反電荷的填料樹脂結(jié)合。這項(xiàng)技術(shù)利用了帶正電荷的樹脂(陰離子交換:DEAE和Q)，或帶負(fù)電荷的樹脂(陽離子交換:CM)。然后，pH或鹽梯度的改變會(huì)促使蛋白質(zhì)從填料樹脂中的被洗脫下來。

 

2.親和層析(3)

●. 親和層析是通過生物分子間強(qiáng)而可逆的相互結(jié)合的方式來純化特定蛋白質(zhì)的高效方法，這種方法在色譜填料樹脂上固定了一種可以與其他蛋白相互作用的蛋白質(zhì)，允許通過改變條件，如pH或鹽濃度，選擇性結(jié)合某種目標(biāo)蛋白并隨后洗脫該目標(biāo)蛋白。

蛋白純化填料樹脂


離子交換純化

抗體親和純化

His-tag蛋白親和純化

Ligand or Chemistry

(Catalog #)

DEAE: 9079 (5 ml) Q:9081 (5 ml)

CM: 9080 (5 ml)

Protein A:9076 (1 ml)

Protein G:9077 (1 ml)

Ni-IMAC:9078 (5 ml)

Base Support

DEAE:Highly cross-linked 6% Sepharose

Q:Highly cross-linked 6% Sepharose

CM:Highly cross-linked 6% Sepharose

Protein A: Rigid, highly crosslinked Agarose

Protein G: Highly cross-linked 4% Sepharose

Highly cross-linked 6% Sepharose

Formats

A drip column / column chromatography

A drip column / column chromatography

A drip column / column chromatography

Binding Capacity (mg/ml)

DEAE: Weak anion exchange 110-160 μmol Cl- /ml media

 

Q: Strong anion exchange 180-250 μmol Cl- /ml media

 

CM: Weak cation exchange 90-130 μmol H+/ml media

Protein A: 60 mg (human IgG)/ml media

 

Protein G: ≥ 20 mg (human IgG/ml media

≥ 40 mg (His-tag protein)/ml media

 

16-23 μmol (Ni2+) /ml media

Equivalent Products

DEAE Sepharose 4FF

Q Sepharose 4FF CM Sepharose 4FF

MabSelect sure LX Protein G Sepharose 4FF

Ni Sepharose 4FF


Protein A/G對(duì)不同物種免疫球蛋白類型的親和力

●. Protein A和Protein G對(duì)各種免疫球蛋白(Ig)亞型、亞類和物種表現(xiàn)出特異性親和力,這種親和力由Ig Fc區(qū)的特性決定。Chondrex在下表中列出了不同物種間Protein A和Protein G與免疫球蛋白亞類的相互作用強(qiáng)度。

物種

免疫球蛋白類型

與Protein A結(jié)合

與Protein G結(jié)合

Human

IgG(normal)

++++

++++

IgG1

++++

++++

IgG2

++++

++++

IgG3

-

++++

IgG4

++++

++++

IgM

-

-

IgA

-

-

IgE

-

-

Mouse

IgG1

+

++++

IgG2a

++++

++++

IgG2b

+++

+++

IgG3

++

+++

Rat

IgG1

-

+

IgG2a

-

++++

IgG2b

-

++

IgG2c

+

++

Goat

IgG

+/-

++

Rabbit

IgG

++++

+++

Sheep

IgG

+/-

++

“-":No binding，"+":Weak binding，“++":Binding，"+++":Moderate Binding，"++++":Strong Binding

 

參考文獻(xiàn)：

●. P.M.Cummins.K. D.Rochfort. B.F.O'Connor, lon-Exchange Chromatography: Basic Principles and Application.Methods Mol.Biol.1485,209-223(2017).

●. A.Jungbauer,R.Hahn,"Chapter 22 lon-Exchange Chromatography" in Methods in Enzymology, R.R.Burgess, Deutscher, Murray P., Eds.(Academic Press,2009)vol.463,pp.349-371.

●. M.Urh, D.Simpson, K.Zhao, Affinity chromatography: general methods. Methods Enzymol. 463,417-438(2009)


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