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ELISA檢測試劑盒的檢測原理和五個操作要點

更新時間:2022-04-15   點擊次數(shù):493次
  ELISA檢測試劑盒檢測原理:采用免疫熒光定量檢測技術(shù)、免疫層析法。用于檢測人體全血、血漿樣本中D-二聚體的含量。將血液樣本和樣品緩沖液在緩沖液瓶中進行混合,緩沖液中的熒光標(biāo)記抗D-二聚體抗體和血液中的D-二聚體抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物。
  ELISA檢測試劑盒操作較繁雜,在操作中應(yīng)留神以下5個方面:
  1. 跟著病況的進展或由其他因素影響,某些抗體在機體內(nèi)的含量發(fā)作大幅動搖,因此有必要對標(biāo)本進行預(yù)處理。間接法測定中,標(biāo)本恰當(dāng)稀釋還可下降非特異性反響。
  2. 加樣一般運用加液器,在ELISA檢測試劑盒中一般有4次加樣:加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物和加間斷液。加標(biāo)本時有必要每份標(biāo)本運用一支移液器吸嘴,避免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和間斷液時則不需更換吸嘴。
  3.在成批手藝檢測中,還應(yīng)留神操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異,使抗原抗體反響和酶促反響時間不一致,對競爭法及定量檢測影響很大,不留神可能會導(dǎo)致過錯效果或定量不準(zhǔn)。
  4. 洗刷是ELISA檢測試劑盒操作過程中決議實驗勝敗的一個關(guān)鍵步驟。目的是除掉未結(jié)合的免疫反響物,間斷抗原抗體反響,除掉標(biāo)本中與反響無關(guān)的成分、游離的酶標(biāo)物以及反響過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)。
  5. 斷定效果須運用ELISA檢測試劑盒測讀儀,比色法判讀可選擇單波長或雙波長,根據(jù)反響液顏色的不同選用不同波長的濾光片,以空白孔校零測定反響孔的吸光度值。酶標(biāo)儀具有杰出的重復(fù)性。